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Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Departamento de Enfermedades Infecciosas, Primer Hospital Afiliado de la Universidad de Suzhou, Ciudad de Suzhou, Provincia de Jiangsu, 215000 Tel.tumores del aparato digestivo con una supervivencia global a los 5 años del 14,1%.Muchos pacientes con CHC son diagnosticados en una etapa avanzada, por lo que la detección temprana es esencial para reducir la mortalidad por CHC.Además de los indicadores de detección de uso común, como la alfafetoproteína sérica (AFP), la alfafetoproteína reactiva con lectina del cristalino (AFP-L3) y la protrombina anormal (proteína II inducida por deficiencia de vitamina K, PIVKA-II), las técnicas de biopsia de fluidos Se ha demostrado que tiene valor diagnóstico en la detección de CHC.En comparación con los procedimientos invasivos, la biopsia de líquido puede detectar metabolitos malignos circulantes.Las técnicas de biopsia de líquido detectan células tumorales circulantes, ADN tumoral circulante, ARN circulante y exosomas y se utilizan para la detección temprana, el diagnóstico y la evaluación pronóstica del CHC.Este artículo revisa la biología molecular y la aplicación de varias técnicas de biopsia de fluidos para aislar biomarcadores prometedores que pueden ser opciones viables para la evaluación temprana de CHC para mejorar la detección temprana de grupos de CHC de alto riesgo.Palabras clave: técnica de biopsia líquida, carcinoma hepatocelular, grupo de alto riesgo.
El carcinoma hepatocelular (HCC) es un tumor maligno común del tracto digestivo, ocupando el sexto lugar entre los nuevos casos de tumores malignos tanto en hombres como en mujeres.1 En todo el mundo, el cáncer de hígado es la tercera causa principal de muerte por cáncer después del cáncer de pulmón y colorrectal, y representa el 8,3 % de las muertes relacionadas con el cáncer por todas las neoplasias malignas.1 El pronóstico del CHC está estrechamente relacionado con el estadio en el momento del diagnóstico.Las razones principales de la supervivencia deficiente en el CHC son las metástasis intrahepáticas, los trombos tumorales en la vena portal y las metástasis a distancia que impiden la resección, y muchas de estas características ya están presentes en los pacientes en el momento del diagnóstico.
Según las pautas de diagnóstico y tratamiento, los principales factores de riesgo para desarrollar CHC son la cirrosis hepática, la infección crónica por el virus de la hepatitis B (VHB) o el virus de la hepatitis C (VHC), la enfermedad del hígado graso alcohólico y la enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA). ).2 Además, los factores de riesgo para CHC incluyen ingesta de alimentos contaminados con aflatoxinas, esquistosomiasis, otras causas de cirrosis, antecedentes familiares de cáncer de hígado, diabetes, obesidad, tabaquismo y daño hepático inducido por fármacos.Los grupos de alto riesgo de 35 y 45 años deben someterse a controles médicos regulares.La detección temprana es una importante estrategia de tratamiento temprano para mejorar la supervivencia general de los pacientes con CHC.
Se recomiendan biomarcadores como AFP, AFP-L3 y PIVKA-II para la detección temprana de HCC3,4.Las técnicas de biopsia líquida han mostrado resultados prometedores en el diagnóstico temprano y la evaluación del tratamiento.5,6 Se ha logrado un progreso significativo en la biopsia líquida de CHC, que puede tener una mayor sensibilidad y especificidad que los marcadores séricos de uso común, como la AFP (Tabla 1).
La AFP es un biomarcador ampliamente utilizado en el CHC y actualmente es el biomarcador más detallado ampliamente utilizado para la detección temprana, el diagnóstico y la evaluación de la enfermedad.Un nivel de AFP persistentemente elevado se considera un factor de riesgo para la progresión del CHC.7,8 La tasa de detección del carcinoma hepatocelular pequeño (sHCC) está aumentando con el desarrollo de la ecografía y la tomografía computarizada, y se ha descubierto que la AFP es particularmente insensible a la detección de hHCC en la práctica clínica.Según un estudio multicéntrico retrospectivo9, se encontró AFP positiva en el 46% (616/1338) de los casos de CHC y en el 23,4% (150/641) de los casos de CHCh.Además, los niveles de AFP están elevados en pacientes con enfermedad hepática crónica y cirrosis.10 Por lo tanto, AFP tiene un efecto de detección limitado para sHCC.11 De acuerdo con las Pautas de práctica clínica de Asia-Pacífico para el carcinoma hepatocelular, no se recomienda el uso de AFP.12 La evidencia clínica sugiere que PIVKA-II es superior a AFP en el tratamiento del CHC y que la combinación de PIVKA-II y AFP tiene un mayor valor diagnóstico en CHC.13 En comparación con la biopsia de tejido, la biopsia de líquido detecta principalmente metabolitos asociados al tumor en los fluidos corporales (sangre, saliva, líquido pleural, líquido cefalorraquídeo u orina) y es menos invasiva para los tejidos.14 Además, las biopsias líquidas pueden reflejar características malignas que no están presentes en el tejido del tumor primario.15 Las biopsias líquidas aún no se prueban en la práctica clínica para todo tipo de tumores, pero su potencial diagnóstico en cáncer está atrayendo la atención de los oncólogos.16 La biopsia de líquido puede detectar células tumorales circulantes (CTC), ADN tumoral circulante (ADNc), ARN libre circulante (ARNec) y exosomas.En este artículo, discutiremos las características, el papel y la aplicación de varias técnicas de biopsia de líquido en la detección temprana de grupos de HCC de alto riesgo.
El ADN extracelular (cfDNA) en muestras de sangre de individuos sanos fue descrito por primera vez en 1948 por Mandel et al.17 cfDNA es un fragmento de ADN libre de células de aproximadamente 160 a 180 pb de longitud, que se origina principalmente a partir de linfocitos y células mieloides.El ctDNA es un fragmento de ADN mutante específico liberado por las células tumorales en la sangre periférica, que representa la información genómica de las células tumorales después de ciertos procesos fisiopatológicos, como la necrosis, la apoptosis y la excreción.La proporción de ctDNA en el total de cfDNA varía ampliamente según el tipo de tumor, y se informa que los fragmentos de cDNA suelen tener menos de 167 pb de longitud.18 El estudio de Underhill mostró que los fragmentos de cfDNA son generalmente más cortos que el cfDNA normal.19 En comparación con las personas sanas, la longitud total de los fragmentos de cfDNA en la sangre de los pacientes con cáncer es más corta, por lo que el cfDNA puede usarse como un indicador de la detección temprana de tumores.El enriquecimiento de ciertos subconjuntos de longitudes de fragmentos de cfDNA puede mejorar la detección de cDNA asociado con tumores sólidos no metastásicos.Los estudios han demostrado que el ctDNA se encuentra en más del 75% de los cánceres avanzados de páncreas, colon, vejiga, gastrointestinal, hígado, ovario, mama, melanoma y cabeza y cuello.20,21 Sin embargo, la cantidad de ctDNA en la sangre depende de la ubicación del tumor.22 En un estudio realizado por Bettegoud, se encontró que los pacientes con cáncer colorrectal, de mama, de hígado, de pulmón y de próstata tenían niveles más altos de ADNc en la sangre que otros tipos de cáncer.Por el contrario, en pacientes con cáncer oral, cáncer de páncreas, cáncer gástrico y glioma, la concentración de cDNA en la sangre fue menor.veintiún
Dado que el ctDNA contiene las mismas mutaciones genéticas que las células tumorales primarias, el cDNA se puede utilizar para detectar mutaciones heterogéneas específicas de tumores y cambios epigenéticos, incluidas la metilación, la hidroximetilación, las variaciones de un solo nucleótido y las variaciones del número de copias.Veintitres
La metilación del ADN es uno de los cambios epigenéticos más comunes que resultan en la represión génica.En comparación con las células normales, existen diferencias en el nivel general de metilación del genoma de la célula tumoral, especialmente en la metilación de los genes supresores de tumores, que pueden detectarse en una etapa temprana, lo que sugiere que los cambios en la metilación del ADN pueden ser un indicador de la metilación temprana. detección de tumorigénesis.Los genes supresores de tumores asociados con el HCC pueden inactivarse mediante la metilación del promotor, estimulando así la tumorigénesis.24 La metilación del ADN es un marcador ideal para el diagnóstico precoz de tumores debido a su especificidad tisular, detectabilidad e independencia de la edad.Además, la metilación del ADN es más común en comparación con las mutaciones somáticas porque hay más regiones objetivo y varios sitios CpG alterados en cada región del genoma objetivo.25 Además de múltiples sitios CpG, se ha identificado una gran cantidad de loci hipermetilados independientes en ctDNA en DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 y RGS10.26 Xu et al.En la comparación de muestras de cfDNA de 1098 pacientes con HCC y 835 controles sanos, se encontró que los genes asociados con HCC se correlacionan fuertemente con las firmas de metilación del cDNA en plasma correspondientes.25 Con base en análisis de laboratorio, se desarrolló un modelo predictivo que contenía 10 marcadores de metilación con sensibilidad y especificidad de 85,7 % y 94,3 %, respectivamente, y estos marcadores estaban altamente correlacionados con la masa tumoral, el estadio del tumor y la respuesta al tratamiento.Estos resultados indican que el uso de marcadores de metilación de ADNc es muy prometedor en el diagnóstico, seguimiento y pronóstico del CHC.En un modelo de metilación que consta de tres genes metilados de forma aberrante (APC, COX2, RASSF1A) y un miARN (miR203) presentado por Lu et al27, la sensibilidad y la especificidad del modelo 27 para diagnosticar CHC asociado con el VHB fueron comparables.80%.Además, el modelo pudo detectar el 75 % de los pacientes con HCC no diagnosticados con un nivel de AFP de 20 ng/mL.El gen de la proteína 1A de la familia de dominios asociados a Ras (RASSF1A) es la principal secuencia repetitiva de ADN en el genoma humano.Araújo et al.concluyó que la hipermetilación del promotor RASSF1A podría ser un biomarcador valioso para la detección temprana de HCC y un objetivo molecular potencial para la terapia epigenética.28 En un estudio, se encontró hipermetilación del promotor RASSF1A en suero en el 73,3 % de los pacientes con CHC.29 El elemento 1 de nucleótido largo intercalado (LINE-1) es otro mediador de retrotransposición altamente activo.Se encontró hipometilación de LINE-1 en el ADN del 66,7 % de las muestras de suero de CHC y se asoció con recurrencia temprana y supervivencia deficiente después de la resección radical.29 La hipermetilación es un proceso genético común que juega un papel único en el desarrollo de cirrosis hepática y CHC.30 Por el contrario, la hidroximetilación es un proceso de desmetilación que induce la reactivación y expresión génica, y la detección del producto 5-hidroximetilcitosina (5-hmC) en este proceso puede utilizarse para identificar un tumor.La metilación y la hidroximetilación del cDNA están asociadas con la tumorigénesis y pueden contribuir a la detección temprana de CHC.En un estudio de 2554 sujetos, se encontraron 31 5-hmC de todo el genoma en muestras de cfDNA, y se identificaron 32 genes comparando secuencias de 5-hmC en pacientes con HCC y grupos de alto riesgo, como aquellos con enfermedades crónicas.Modelos diagnósticos de enfermedades hepáticas.y cirrosis.Este modelo fue superior a AFP para distinguir HCC de tejido no tumoral.
Las mutaciones en las regiones codificantes pueden dar lugar a anomalías transcripcionales, que pueden dar lugar a cambios en las secuencias de proteínas y, en última instancia, al cáncer.Las variantes de un solo nucleótido son marcadores genómicos importantes para la detección temprana de tumores debido a su alta confiabilidad tisular y su alta especificidad tumoral y tisular.Numerosos estudios relacionados con el HCC que utilizan la secuenciación de próxima generación (NGS) para la secuenciación del exoma y del genoma completo del cáncer han identificado genes celulares mutados comunes como TP53 y CTNNB1, así como varios, incluidos ARID1A, MLL, IRF2.Los nuevos genes ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 y JAK1 muestran tasas de mutación moderadas. El análisis de la función del gen mutante sugiere que las alteraciones en la remodelación de la cromatina, la transducción de señales Wnt/β-catenina y JAK/STAT, la vía del ciclo celular P53, los modificadores epigenéticos, las vías del estrés oxidativo, la vía PI3K/AKT/MTOR y la vía RAS/RAF/ La vía de la cinasa MAPK desempeña funciones cruciales en la oncogénesis del CHC.32,33 En un estudio en el que se detectaron mutaciones asociadas a tumores, Huang et al. encontraron que la frecuencia de mutaciones asociadas a tumores dependientes de ctDNA era del 19,5 % y la especificidad del 90 %. .34 Además, los pacientes que experimentaron invasión vascular tenían más probabilidades de tener mutaciones de ctDNA (P=0,041) y una supervivencia libre de recurrencia más corta (P<0,001). El análisis de la función del gen mutante sugiere que las alteraciones en la remodelación de la cromatina, la transducción de señales Wnt/β-catenina y JAK/STAT, la vía del ciclo celular P53, los modificadores epigenéticos, las vías del estrés oxidativo, la vía PI3K/AKT/MTOR y la vía RAS/RAF/ La vía de la cinasa MAPK desempeña funciones cruciales en la oncogénesis del CHC.32,33 En un estudio en el que se detectaron mutaciones asociadas a tumores, Huang et al. encontraron que la frecuencia de mutaciones asociadas a tumores dependientes de ctDNA era del 19,5 % y la especificidad del 90 %. .34 Además, los pacientes que experimentaron invasión vascular tenían más probabilidades de tener mutaciones de ctDNA (P=0,041) y una supervivencia libre de recurrencia más corta (P<0,001).El análisis de la función del gen mutante sugiere que los cambios en la remodelación de la cromatina, la señalización de Wnt/β-catenina y JAK/STAT, la vía del ciclo celular P53, los modificadores epigenéticos, las vías del estrés oxidativo, la vía PI3K/AKT/MTOR y la vía de la quinasa RAS/RAF/MAPK un papel crítico en la tumorigénesis del CHC.32,33 En un estudio que encontró mutaciones asociadas a tumores, Huang et al.encontraron que la frecuencia de mutaciones asociadas a tumores dependientes de ctDNA era del 19,5 % y la especificidad del 90 %..34 крое» тог, у пациентов с сддистianteй инвазией чаще всрatuidor .34 Además, los pacientes con invasión vascular tenían más mutaciones de cDNA (P=0,041) y una supervivencia libre de enfermedad más corta (P<0,001).El análisis funcional de los genes mutantes reveló la remodelación de la cromatina, la señalización de Wnt/β-catenina y JAK/STAT, la vía del ciclo celular P53, los modificadores epigenéticos, la vía del estrés oxidativo, la vía PI3K/AKT/MTOR y la vía RAS/RAF/MAPK La vía de la quinasa juega un papel fundamental en la oncogénesis del CHC. 32,33 在 一 项 检测 到 肿瘤 相关 突变 的 研究 中 ， ， ， ， 等 人 发现 相关 突变 依赖于 依赖于 依赖于 的 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 ， 经历 血管 的 患者 更 有 可能 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 发生 eléctrica突变（P=0.041）和更短的无复发生存期（P<0.001）。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， ， 等 发现 肿瘤 相关 依赖于 依赖于 的 的 为 为 为 19.5% ， 特异性 为 90% .34 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 发生 发生 突变 （p = 0.041） 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更 更短的无复发生存期（P<0.001）。32,33 En un estudio que encontró mutaciones asociadas a tumores, Huang et al.encontraron que las mutaciones asociadas a tumores dependían en un 19,5 % del ADNc con una especificidad del 90 % 34. Además, los pacientes que habían sufrido una invasión vascular tenían más probabilidades de desarrollar ADNc.мутация (P = 0,041) и более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutación (P = 0,041) y supervivencia libre de enfermedad más corta (P <0,001).Otro gen conductor común de HCC es TP53, que tiene una tasa de mutación de más del 30%.Los estudios han demostrado que la frecuencia de mutaciones TP53 en ctDNA en sangre y orina oscila entre el 5 % y el 60 %.35 El estudio de Johan mostró que el espectro de mutación de ctDNA en el CHC tardío tiene una tasa de mutación similar a la del CHC temprano, incluido el promotor TERT (51 %), TP53 (32 %), CTNNB1 (17 %), PTEN (8 %), mutaciones en AXIN1., ARID2, KMT2D y TSC2 (6% cada uno).36 El oncogén β-catenina (CTNNB1) juega un papel importante en la vía de señalización de Wnt.El coactivador de transcripción CTNNB1 puede promover la expresión génica, lo que puede conducir a la proliferación celular, la inhibición de la apoptosis y la angiogénesis.CTNNB1 también puede interactuar con TERT para inducir la transformación de hepatocitos.33 El promotor TERT está frecuentemente mutado en algunos tumores sólidos.Las alteraciones en TERT, uno de los cambios genéticos más tempranos en la transformación maligna del CHC, pueden conducir a la reactivación de la telomerasa en los hepatocitos cirróticos y pueden promover la proliferación y prevenir el envejecimiento.Se ha informado que las mutaciones en el promotor TERT 33-37 ocurren en el 59-90% de los pacientes con nódulos hepáticos proliferativos y HCC temprano y están asociadas con la supervivencia.38
Los cambios en el número de copias (CNA) son un subtipo importante de mutaciones somáticas.La investigación ha demostrado que la carga generalizada y focal de CNA es una firma genómica capaz de predecir la infiltración y exclusión inmune tumoral en algunos tipos de cáncer.39 Señalización de infiltración activa, alta actividad citolítica, inflamación severa y marcadores genéticos asociados con la presentación de antígenos en CHC.El análisis de la matriz de datos de polimorfismos de un solo nucleótido en 477 sujetos reveló una baja carga sobre el SNC.Por el contrario, los tumores cromosómicamente inestables con una alta carga extensa de CNA mostraron signos de rechazo inmunológico y se asociaron con proliferación, reparación de ADN y disfunción de TP53.Xu et al.mostró que el grupo de HCC tenía puntajes CNA más altos que el grupo de enfermedad hepática crónica.40 Usando la secuenciación del genoma completo de una sola célula, se encontró que los CNA aparecen temprano en la hepatocarcinogénesis y permanecen relativamente estables durante la progresión del tumor.41Chung et al.encontraron que los niveles de cfDNA estaban significativamente elevados en pacientes con CHC y que los CNA de todo el genoma en cfDNA eran un importante marcador de pronóstico independiente en pacientes con CHC tratados con sorafenib.42 Los pacientes con una mayor carga de CNA tenían más probabilidades de progresión de la enfermedad y muerte que aquellos con una menor carga de CNA.Ollerich et al.encontró que el índice de inestabilidad del número de copias (CNI) se puede usar para evaluar CNA en cfDNA de pacientes con cáncer.Señalaron que los pacientes con cáncer avanzado tenían puntajes CNI significativamente más altos que un grupo de control, que evalúa la respuesta del paciente a la quimioterapia sistémica y la inmunoterapia.43 Estos resultados sugieren que los CNA encontrados en muestras de biopsia líquida pueden servir como indicadores de pronóstico en pacientes con cáncer avanzado.HCC en el contexto de la terapia sistémica.
Actualmente, los métodos utilizados para detectar ctDNA se pueden dividir en métodos dirigidos y no dirigidos.En resumen, los métodos específicos como la reacción en cadena de la polimerasa digital (dPCR), la PCR digital BEAMing, el sistema de mutación refractaria de amplificación-PCR, Capp-Seq y Tam-Seq son muy sensibles a los genes predefinidos.Los métodos fuera del objetivo, como la secuenciación del genoma completo y NGS, brindan una visión integral de todo el panorama genómico.44 En comparación con los paneles objetivo, la secuenciación del genoma completo puede detectar no solo mutaciones puntuales e inserciones, sino también reordenamientos y variaciones en el número de copias.pronóstico, y CTC y cfDNA son buenos indicadores que se pueden utilizar para la monitorización dinámica de HCC.45 Además, el análisis de cfDNA puede ser más útil para detectar CHC.Yan et al.mostró que el cfDNA en el plasma de pacientes con HCC era significativamente mayor que en pacientes con fibrosis hepática y controles sanos.En comparación con AFP, se espera que ctDNA sea un mejor marcador de detección para CHC temprano.46 En un estudio prospectivo de 47 biopsias líquidas que analizaron cfDNA y proteína en una población, se demostró que son eficaces para diferenciar a los pacientes con HCC de los pacientes sin HCC.En un seguimiento de 331 pacientes con ultrasonido normal y AFP negativo, la sensibilidad y la especificidad de cfDNA para diagnosticar CHC fueron del 100 % y 94 %, respectivamente, por lo que el cDNA pudo detectar CHC en individuos seropositivos para HBsAg asintomáticos.En el estudio Yeo48 se encontró una alta frecuencia (92,5%) de hipermetilación del promotor RASSF1A en pacientes con CHC.Además, Xu et al.creó un modelo de diagnóstico para predecir CHC utilizando un panel de marcadores de metilación específicos con una especificidad y una sensibilidad del 90,5 % y el 83,3 %, respectivamente.El panel permite distinguir a los pacientes con HCC de los pacientes con otras enfermedades hepáticas, lo cual es mejor que AFP.También encontraron que los controles normales que dieron positivo pueden tener factores de riesgo de CHC, como infección por VHB o antecedentes de consumo de alcohol.25 Nuestra hipótesis es que los factores de alto riesgo para CHC pueden promover la hipermetilación de cfDNA, lo que luego contribuye a la progresión de CHC y, por lo tanto, cfDNA puede desempeñar un papel clave en la detección de grupos de alto riesgo.Cay et al.resumir la gama completa de mutaciones de ctDNA y ofrecer una estrategia sólida para evaluar la carga tumoral en los pacientes.49 Esta estrategia puede identificar la tumorigénesis una mediana de 4,6 meses antes del cambio de imagen y ha demostrado un rendimiento diagnóstico superior en comparación con los biomarcadores séricos AFP, AFP-L3 y PIVKA-II.El valor diagnóstico de las pruebas de cDNA se ha demostrado cuando no se dispone de evaluación de imágenes, por lo que las pruebas de cDNA son valiosas en el diagnóstico de CHC temprano en grupos de alto riesgo.Recientemente, los científicos utilizaron la tecnología NGS para analizar indicadores de variación genética multivariable (que incluyen 5-hidroximetilcitosina, motivo 5′, fragmentación, rastro de nucleosoma, HIFI) en 3204 muestras clínicas y cfDNA.50 Los modelos HIFI revalidados con tres conjuntos independientes de entrenamiento, prueba y prueba mostraron una discriminación estable y confiable entre poblaciones de HCC y no HCC con una sensibilidad del 95,79 % y 95,42 % en conjuntos de prueba y prueba específicos de HCC, respectivamente.Los sexos fueron 95,00% y 97,83%, respectivamente.El valor diagnóstico del método HIFI es mayor que el de AFP para distinguir el CHC de la cirrosis.Además, el ctDNA también se utiliza en el tratamiento quirúrgico.Atsushi et al.determinaron los niveles séricos preoperatorios de ctDNA en pacientes con HCC y encontraron que la tasa de recurrencia y la tasa de metástasis extrahepática en el grupo cDNA positivo eran significativamente más altas que en el grupo cDNA negativo, y los niveles de cDNA estaban significativamente correlacionados.con progresión tumoral.51 Al ser un biomarcador muy sensible, el ctDNA puede predecir la capacidad del CHC para invadir los vasos.Wang et al.realizó la secuenciación del genoma completo de 46 pacientes con HCC, y el análisis multivariante mostró que el valor umbral de la frecuencia alélica de la variante de cDNA para la invasión en microvasos es 0,83 %, sensibilidad 89,7 % y especificidad 80,0 %.un factor de riesgo independiente para la invasión microvascular en CHC resecable, lo que sugiere que el ADNc puede ayudar a guiar el tratamiento óptimo.En conclusión, el ctDNA está totalmente implicado en la aparición y el desarrollo de CHC y puede utilizarse para la detección temprana, la evaluación quirúrgica y el control de la enfermedad.
Las CTC son células malignas derivadas de tumores primarios o metástasis que metastatizan al torrente sanguíneo.Las células tumorales secretan metaloproteinasas de matriz (MMP), que rompen la membrana basal, lo que permite que las células tumorales entren directamente en los vasos sanguíneos y linfáticos.Sin embargo, la mayoría de las CTC se eliminan rápidamente por anoikis, ataque inmunitario o tensión de cizallamiento.53 La transición epitelial-mesenquimatosa (EMT) permite que las CTC se aíslen fácilmente del tejido del tumor primario, invadan los capilares y adquieran una supervivencia, metástasis, invasividad y resistencia a los medicamentos significativamente mejoradas.Los estudios han demostrado que existe una profunda heterogeneidad entre las diversas células tumorales en los tumores metastásicos primarios.Por lo tanto, el análisis de CTC puede conducir a una comprensión integral de la heterogeneidad de las células tumorales.54
Los marcadores específicos para las CTC asociadas a CHC incluyen glipicano-3 (GPC3), receptor de asialoglicoproteína (ASGPR), molécula de adhesión de células epiteliales (EpCAM) y marcadores asociados a células madre como CD44, CD90, 55 y molécula de adhesión intercelular 1 (ICAM1).) .56 El marcador GPC3 es una proteína anclada a la membrana celular que se utiliza clínicamente para el análisis patológico y la caracterización del CHC.57 La expresión de GPC3 es más común en células tumorales de CHC con diferenciación intermedia y baja y promueve la migración extrahepática;además, la presencia de GPC3+ CTC indica CHC metastásico.58 ASGPR es una proteína transmembrana que se expresa solo en la superficie de los hepatocitos y se expresa mucho en HCC bien diferenciados.EpCAM es una de las proteínas asociadas a la membrana más utilizadas para capturar CTC.EpCAM se ha identificado como un marcador de superficie de células de CHC con características de células madre,59 que se correlaciona con varias características clínico-patológicas de CHC, como la invasión vascular, los niveles de AFP evaluados y el estadio avanzado de cáncer de hígado en el Hospital de Barcelona (BCLC).El fenotipo 60 CTC EMT es altamente metastásico.54 Los procesos EMT en el CTC promueven la metástasis de HCC.Se ha estudiado la expresión de marcadores EMT como vimentina, torsión, unión de dedos de zinc E-box (ZEB) 1, ZEB2, caracol, babosa y E-cadherina en CTC derivadas de hígado de pacientes con HCC.58 El sistema CanPatrol™ desarrollado por Cheng [61] clasificó las CTC en tres subgrupos fenotípicos según los marcadores predominantemente expresados: fenotipo epitelial (EpCAM, CK8/18/19), fenotipo mesenquimatoso (vimentina, enrollado) y fenotipos mixtos.En 176 pacientes, la CTC total fue superior a la AFP para diferenciar el CHC de la enfermedad hepática benigna.Los valores de AUC para CTC total, AFP y CTC y AFP totales combinados fueron 0,774 (IC 95 %, 0,704–0,834), 0,669 (IC 95 %, 0,587–0,750) y 0,821 (IC 95 %, 0,756–0,886). ).), respectivamente.La clasificación de CTC basada en EMT puede predecir el diagnóstico de CHC, la recurrencia temprana, la metástasis y un tiempo total más corto.
Actualmente, los métodos para detectar CSC incluyen métodos físicos y métodos biológicos.Los métodos físicos, a menudo denominados enriquecimiento basado en propiedades biofísicas, dependen principalmente de las propiedades físicas de la CSC, como el tamaño, la densidad, la carga, la movilidad y la deformabilidad.Dependiendo de las propiedades físicas, existen varios métodos como sistemas basados ​​en filtración, dielectroforesis, etc. Este último, también conocido como enriquecimiento basado en inmunoafinidad, se basa principalmente en la unión antígeno-anticuerpo ya que el método utiliza anticuerpos contra biomarcadores específicos del tumor. como EpCAM, ASGPR, receptor 2 del factor de crecimiento epidérmico humano (HER2), antígeno prostático específico (PSA), pancitoqueratina humana (P-CK) y carbamoil fosfato sintasa 1 (CPS1).62 Otro tipo, denominado método sin enriquecimiento, utiliza la citometría de flujo para diferenciar las CTC de los leucocitos en función de una mayor proporción y tamaño nuclear-citoplasmático.Actualmente, la única prueba aprobada por la FDA para la detección de CTC es el sistema Cell-Search™, que utiliza el marcador de superficie celular EpCAM. Sin embargo, la detección de CTC basada en marcadores combinados podría aumentar la tasa de positividad.54 Una mezcla de anticuerpos contra ASGPR y CPS1 logró una tasa de detección de CTC del 91% en pacientes con HCC.63 Zhang et al usaron un CTC-Chip con anticuerpos contra ASGPR, P -CK y CPS1, y diferenciaron a los pacientes con CHC de aquellos con enfermedad hepática benigna o cáncer sin CHC a una tasa del 100 %.64 Un estudio realizado por Wang detectó EpCAM+ CTC en el 60 % de 42 pacientes con CHC y encontró correlaciones significativas tasa y el número de CTC con estadio TNM.65 Guo et al encontraron que una puntuación de PCR derivada de CTC estaba elevada en 125/171 (73 %) pacientes cuyo nivel de AFP era <20 ng/ml con una sensibilidad del 72,5 % y un especificidad del 95,0 %, en comparación con el 57,0 % y el 90,0 % para la AFP con un punto de corte de 20 ng/mL.66 La combinación de AFP y CTC puede mejorar la detección de CHC.45 Se cree que las CTC tienen una ventaja sobre la AFP en la detección temprana de grupos en alto riesgo de CHC. Sin embargo, la detección de CTC basada en marcadores combinados podría aumentar la tasa de positividad.54 Una mezcla de anticuerpos contra ASGPR y CPS1 logró una tasa de detección de CTC del 91% en pacientes con HCC.63 Zhang et al usaron un CTC-Chip con anticuerpos contra ASGPR, P -CK y CPS1, y diferenciaron a los pacientes con CHC de aquellos con enfermedad hepática benigna o cáncer sin CHC a una tasa del 100 %.64 Un estudio realizado por Wang detectó EpCAM+ CTC en el 60 % de 42 pacientes con CHC y encontró correlaciones significativas tasa y el número de CTC con estadio TNM.65 Guo et al encontraron que una puntuación de PCR derivada de CTC estaba elevada en 125/171 (73 %) pacientes cuyo nivel de AFP era <20 ng/ml con una sensibilidad del 72,5 % y un especificidad del 95,0 %, en comparación con el 57,0 % y el 90,0 % para la AFP con un punto de corte de 20 ng/mL.66 La combinación de AFP y CTC puede mejorar la detección de CHC.45 Se cree que las CTC tienen una ventaja sobre la AFP en la detección temprana de grupos con alto riesgo de CHC.Sin embargo, la detección combinada de CTC basada en marcadores puede aumentar el porcentaje de resultados positivos.54 Una mezcla de anticuerpos anti-ASGPR y CPS1 logró una tasa de detección de CTC del 91 % en pacientes con CHC.63 Zhang et al.usó un CTC-Chip con anticuerpos contra ASGPR, P-CK y CPS1, y también distinguió a los pacientes con CHC de aquellos con enfermedad hepática benigna o sin CHC en una tasa del 100 %.частота и количество ЦОК со стадией TNM.65 Guo и соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный из ЦОК, был повышен у 125/171 (73%) пациентов, у которых уровень АФП был <20 нг/мл с чувствительностью 72,5% и специфичность 95,0% по сравнению с 57,0% и 90,0% для АФП при пороговом уровне 20 нг/мл.66 Комбинация АФП и ЦОК может улучшить обнаружение ГЦК.45 Считается, что ЦОК имеют преимущество перед АФП при раннем скрининге групп. frecuencia y número de CTC con estadio TNM65. Guo et al encontraron que la PCR derivada de CTC estaba elevada en 125/171 (73%) pacientes que tenían niveles de AFP <20 ng/mL con una sensibilidad del 72,5% y una especificidad de 95,0 % en comparación con 57,0 % y 90,0 % para AFP a un nivel de corte de 20 ng/mL.66 La combinación de AFP y CTC puede mejorar la detección de HCC.45 Se considera que las CTC tienen una ventaja sobre AFP en la detección temprana gruposcon alto riesgo de CHC.Sin embargo, la detección combinada de CTC basada en marcadores puede aumentar el porcentaje de resultados positivos.54 Una mezcla de anticuerpos anti-ASGPR y CPS1 logró una tasa de detección de CTC del 91 % en pacientes con CHC.63 Zhang et al.utilizó chips CTC con anticuerpos contra ASGPR, P-CK y CPS1 y distinguió a los pacientes con CHC de los que tenían enfermedad hepática benigna y no CHC con un 100 %.64 El estudio de Wang identificó el 60 % de las CTC EpCAM+ en 42 pacientes con CHC y encontró una correlación significativa entre la incidencia y el número de CTC en la etapa TNM. 65 Guo 等 人 发现 ， 在 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 中 中 ， CTC 衍生 的 的 PCR 评分 升高 ， 敏感性 为 72.5%， 特异性 为 95.0%， 而 AFP 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值为20 ng/mL 时的特异性为57,0 % 和90,0 %。 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， CTC 衍生 PCR 评分 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 95.0%， AFP 在 截止 截止 截止 截止 截止截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 的 特异性 为 57.0% 和 90.0%。65 Guo et al.обнаружили, что у 125/171 (73%) пациентов с уровнем АФП <20 нг/мл показатели ПЦР, полученные с помощью ЦОК, были повышены с чувствительностью 72,5% и специфичностью 95,0%, в то время как АФП на уровне отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. encontraron que en 125/171 (73 %) pacientes con niveles de AFP <20 ng/mL, los valores de PCR derivados de CTC estaban elevados con una sensibilidad del 72,5 % y una especificidad del 95,0 %, mientras que la AFP estaba en el punto de corte específico fue de 20 ng/mL.ml fue 57,0% y 90,0%.66 La combinación de ORP y CTC mejora la detección de HCC.45 Se cree que las CTC son superiores a la AFP en la detección temprana de poblaciones de CHC de alto riesgo.Por lo tanto, para los grupos de CHC de alto riesgo y CTC positivos, las pruebas de CTC deben combinarse de forma rutinaria con ultrasonido y detección de AFP.Sin embargo, las CTC se consideran predictores importantes de metástasis y recurrencia tumoral, y la detección de CTC no se recomienda de forma independiente como herramienta de diagnóstico.62 Por lo tanto, CTC puede servir como un mejor biomarcador predictivo que otros marcadores utilizados actualmente. Zhou et al encontraron que los pacientes con números elevados de CTC EpCAM+ y células T reguladoras mostraron un mayor riesgo de desarrollar recurrencia de CHC que aquellos con números bajos de CTC, con una tasa de recurrencia de 66,7% frente a 10,3% (P < 0,001).67 Un estudio similar fue informado por Zhong et al.68 Además, Qi encontró que 101 de 112 pacientes (90,81%) con CHC, incluidos aquellos con enfermedad en etapa temprana, fueron positivos para CTC y que se detectaron nódulos de CHC muy pequeños después de 3 a 5 meses de seguimiento. Zhou et al encontraron que los pacientes con números elevados de EpCAM+ CTC y células T reguladoras mostraron un mayor riesgo de desarrollar recurrencia de CHC que aquellos con bajos números de CTC, con una proporción de recurrencia de 66,7% frente a 10,3% (P < 0,001).67 A Zhong et al.68 informaron un estudio similar. Además, Qi encontró que 101 de 112 pacientes (90,81 %) con CHC, incluidos aquellos con enfermedad en etapa temprana, eran positivos para CTC y que se detectaron nódulos de CHC muy pequeños después de 3 a 5 meses de seguimiento. Чжоу y др.обнаружили, что у пациентов с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток риск развития рецидива ГЦК был выше, чем у пациентов с низким количеством ЦОК, с коэффициентом рецидивов 66,7% против 10,3% (P <0,001)67. Zhou et al encontraron que los pacientes con EpCAM+ CTC y linfocitos T reguladores elevados tenían un mayor riesgo de recurrencia de CHC que aquellos con CTC bajos, con una tasa de recurrencia del 66,7 % frente al 10,3 % (P<0,001)67.Un estudio similar fue realizado por Zhong et al.68. Además, Qi descubrió que 101 de 112 pacientes (90,81 %) con CHC, incluidos aquellos con enfermedad temprana, tenían CTC y que se detectaron nódulos de CHC muy pequeños después de 3 a 5 meses de seguimiento. Zhou 等 人 发现 ， 与 CTC 数量 较 少 的 的 患者 相比 ， ， 调节性 CTC 和 调节性 T 细胞 数量 升高 的 患者 发生 发生 复发 的 风险 更 高 ， ， 分别 为 为 为 为 66.7% 和 10.3% (p <0.001)。 Zhou 等 人 发现 与 与 CTC 数量 少 的 患者 相比 ， ， Epcam+ CTC 和 T 细胞 的 患者 发生 发生 HCC 复发 更 更 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 eléctrico eléctrica (为 为 为 为 为 为. p<0.001)。。。。。。。。。。。。。。。 Чжоу y др.обнаружили, что пациенты с повышенным количеством ЦОК EpCAM+ и регуляторных Т-клеток имели более высокий риск рецидива ГЦК по сравнению с пациентами с меньшим количеством ЦОК, с частотой рецидивов 66,7% и 10,3% соответственно (P <0,001). Zhou et al.encontraron que los pacientes con EpCAM+ CTC y linfocitos T reguladores elevados tenían un mayor riesgo de recurrencia de CHC en comparación con pacientes con menos CTC, con tasas de recurrencia del 66,7 % y el 10,3 %, respectivamente (p < 0,001).Un estudio similar fue informado por Zhong et al.68 Además, Qi descubrió que 101 de 112 pacientes con CHC (90,81 %), incluidos los pacientes con enfermedad temprana, tenían resultados positivos de CTC y encontraron nódulos de CHC muy pequeños después de 3 visitas.Observación hasta 5 meses.También encontraron CTC en 12 pacientes con infección crónica por VHB y encontraron pequeños tumores de HCC dentro de los 5 meses en 2 pacientes CTC positivos.69 Por lo tanto, las CTC se pueden usar para predecir CHC, 70 pero se pueden usar de manera más rutinaria como biomarcadores predictivos.
Al igual que el cfDNA, el cfRNA se libera en el torrente sanguíneo a través de varios sistemas.Estas moléculas en la sangre periférica representan el tejido canceroso de origen.En comparación con los marcadores detectados por métodos no invasivos, los cfRNA se regulan de forma más dinámica, son específicos de tejido y abundantes en el entorno extracelular.La importancia y el valor de diagnóstico de 71 miRNAs (miRNAs) en HCC se ha informado en muchos estudios.Los miARN son ARN no codificantes (ncARN) endógenos que regulan diversas actividades biológicas moleculares al inhibir la traducción de los ARN mensajeros (ARNm) diana.Los miARN están ubicados en cuerpos apoptóticos encapsulados en exosomas, pero también pueden unirse de manera estable a proteínas y lípidos séricos en sangre periférica y pueden usarse para evaluar CHC.Los microARN están involucrados en la regeneración del hígado, el metabolismo de los lípidos, la apoptosis, la inflamación y el desarrollo de CHC.72 Los miARN oncogénicos como miR-21, miR-155 y miR-221 son bien conocidos en el CHC.En particular, miR-21 juega un papel clave en la síntesis de colágeno en la matriz extracelular y la fibrosis y promueve la hepatocarcinogénesis al activar las células madre hematopoyéticas.72,73 Los miARN supresores de tumores en CHC incluyen miARN-122, miARN-29, la familia Let-7 y la familia miARN-15.La familia Let-7 consta de muchos miARN supresores de tumores que se dirigen a la familia RAS.La familia miR-15 incluye miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 y miR-497, que tienen secuencias complementarias para ciertos ARNm.Además, los ARN largos no codificantes (lncRNA) y los ARN circulares (cirRNA) también son importantes para la detección temprana de HCC.Los lncRNA representan la clase más amplia de ncRNA, incluidos los ncRNA similares a mRNA, y están involucrados en la patogénesis de muchas enfermedades humanas.Los LncRNA desempeñan un papel regulador en el microambiente hepático y en la enfermedad hepática crónica.74 Los CircRNA también son una clase de ncRNA con múltiples funciones en la regulación de la expresión génica.Recientemente, los circRNA se han considerado como herramientas de diagnóstico para HCC.
El ARN libre circulante tiene una estabilidad notable, incluida la resistencia a la temperatura, el pH y la ARNasa, lo que hace que el aislamiento del ARNfn de la sangre periférica sea menos tedioso utilizando métodos de purificación de ARN estándar.Los métodos más utilizados incluyen NGS, microarrays y RT-qPCR.NGS permite medir los microARN en todo el genoma.Sin embargo, este método es costoso y el análisis no está estandarizado.Por el contrario, la RT-qPCR es económica, amplifica rápidamente los ácidos nucleicos y ofrece muchas ventajas, como una mayor sensibilidad, una mayor precisión, un rango dinámico más amplio y requiere menos muestras.Los microarrays son otro método utilizado para la detección de miARN basado en la hibridación sensible y específica de los miARN diana con sondas de ADN complementarias, 75 pero el análisis de los datos de los microarrays requiere mucho tiempo.
Se ha informado que miR-122 y Let-7 circulantes son potencialmente útiles para diagnosticar CHC en etapa temprana en grupos de alto riesgo, marcadores en pacientes con nódulos premalignos asociados con el VHB y CHC en etapa temprana.76 Cai et al.encontró que los miembros de la familia Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 y miR-199a/b) están en riesgo de CHC en pacientes con hepatitis.La familia Let-7 puede servir como un biomarcador sustituto eficaz para predecir el desarrollo de CHC en grupos de alto riesgo asociado con hepatitis C crónica. 77 miR-122 tiene una alta precisión diagnóstica en la detección temprana de CHC en pacientes con cirrosis hepática.78 El MiR-107 circulante en suero también ha sido evaluado en las primeras etapas de CHC, 79 y ha mostrado un buen potencial en poblaciones de alto riesgo.Zhou et al informaron que un panel de miARN (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a y miR-801) puede diferenciar el CHC de la hepatitis B crónica (CHB) y la cirrosis la sensibilidad fue 79,1% y 75%, y la especificidad 76,4% y 91,1%, respectivamente.80 En el CHC relacionado con el VHB, encontramos que los niveles de miR150 se redujeron significativamente en comparación con los de los pacientes con VHB crónico sin CHC (sensibilidad del 79,1 %, especificidad del 76,5 %).-224 fue elevado en HCC en comparación con controles sanos, y los análisis de subgrupos mostraron niveles más altos en pacientes con HCC asociado con HBV.Los pacientes con cirrosis asociada con hepatitis B y HCC identificaron un clasificador de siRNA que contiene siete siRNA expresados ​​diferencialmente que pueden detectar HCC en diferentes controles;El rango de AUC en la detección temprana es mejor que el de los voluntarios AFP.Descubrieron que cuatro miARN (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p y miR-365a-3p) podían distinguir a los pacientes con HCC de los pacientes sin HCC.Cinco miARN que sobreexpresan (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p y miR-148a-3p) se consideran posibles infecciones por VHB en HCC, cirrosis y biomarcadores de CHB, especialmente miR-34a-5p pueden ser biomarcadores para la cirrosis hepática,85 y pueden ser biomarcadores potenciales para la detección temprana de CHC en poblaciones de alto riesgo.El lncRNA más estudiado en HCC está altamente activado en cáncer de hígado (HULC).Otros estudios han demostrado que la HULC que circula en pacientes con CHC se puede utilizar como marcador de diagnóstico porque este lncRNA está muy regulado al alza en pacientes con CHC en comparación con individuos sanos.71,86 Entre otros lnRNA, LINC00152 se considera el mejor lncRNA de diagnóstico debido a su alta AUC, sensibilidad y especificidad.86 En un estudio, la expresión en sangre periférica de LINC00152 aumentó gradualmente desde los controles sanos normales hasta los pacientes con HCC y cirrosis, y finalmente fue más alta en HCC.Los estudios de la expresión de circSMARCA5 en el plasma de pacientes con HCC han mostrado una disminución progresiva de la expresión en HCC que va desde hepatitis hasta cirrosis y lesiones precancerosas.87 El análisis de las curvas ROC confirmó el potencial de estos circRNA para distinguir a los pacientes con hepatitis o cirrosis hepática de aquellos con CHC, especialmente aquellos con niveles de AFP por debajo de 200 ng/mL.Además, Zhu analizó 13 617 ARN cíclicos en muestras de plasma de pacientes con CHC asociado al VHB y confirmó que 6 ARN cíclicos se expresaron de manera diferente en el CHC y la cirrosis asociada al VHB, lo que sugiere que los ARNc pueden ser beneficiosos.marcadores para la detección temprana de grupos de alto riesgo, como los asociados con enfermedades hepáticas, pacientes con esclerosis.88
Los exosomas son vesículas de membrana de 40 a 160 nm de diámetro;múltiples vesículas intracelulares se fusionan con la membrana celular y se liberan en la matriz extracelular.Contienen muchos componentes activos, incluidos lípidos, proteínas, ARN y ADN, y desempeñan un papel clave en la comunicación entre las células, tanto las células con CHC como las que no lo son.89,90 Los exosomas regulan la progresión del CHC al activar los fibroblastos de los hepatocitos y las células estrelladas, las células inmunitarias, los hepatocitos normales y las células del CHC.91 En el microambiente tumoral, las células tumorales producen una gran cantidad de exosomas que se transportan de las células cancerosas a las células inmaduras, que a su vez participan en la oncogénesis, la degradación y la señalización celular.92 Los estudios han demostrado que los exosomas pueden transferir oncogenes a las células normales durante los procesos patológicos, lo que puede ser uno de los mecanismos de invasión tumoral y metástasis.93 El papel de los exosomas en la progresión del cáncer puede ser dinámico y específico para el tipo de cáncer, 89 Los exosomas pueden ser internalizados por células adyacentes o distantes para regular múltiples genes diana en las células receptoras que pueden estar involucrados en la comunicación intercelular, iones e interacciones del microambiente celular, pueden mediar en la señalización celular y el metabolismo.94 Las características y los cambios dinámicos de las moléculas de carga del exosoma reflejan directamente las características y los cambios dinámicos de las células tumorales parentales,95 que también es la base para el uso de exosomas en el diagnóstico y pronóstico del cáncer, así como para predecir la respuesta individual a la terapia contra el cáncer. ..96
Los métodos de laboratorio tradicionales para aislar y analizar exosomas son complejos, de varios pasos y requieren mucho tiempo, e incluyen ultracentrifugación, filtración, cromatografía de exclusión por tamaño, purificación por inmunoafinidad, transferencia Western, ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA), PCR y análisis de flujo.Los sistemas miniaturizados y las plataformas de laboratorio en un chip que utilizan micro/nanotecnología se están desarrollando ampliamente para el aislamiento in situ rápido y conveniente de los exosomas.El análisis de seguimiento de nanopartículas (NTA) es un método ampliamente utilizado para caracterizar el tamaño y la concentración de exosomas, incluidos métodos como nanopartículas magnéticas y polihidroxialcanoatos.Los métodos microfluídicos y electroquímicos también pueden detectar rápidamente exosomas con altos rendimientos.
Las proteínas exosómicas son marcadores importantes para el diagnóstico de CHC.En el estudio de Arbelaiz, el nivel de la proteína de unión a SH3 RasGAP 98 (G3BP) y el receptor de inmunoglobulina polimérica (PIGR) se elevó significativamente en los exosomas derivados de CHC, y la supuesta eficacia combinada de las dos proteínas fue superior a la de AFP.La sobrecarga de hierro es un factor importante que contribuye al desarrollo de CHC.Tseng informó que la hepcidina puede desempeñar un papel clave en la resistencia al CHC.99 Los exosomas derivados del suero de pacientes con CHC tenían un número de copias significativamente mayor de variantes de ARNm de hepcidina que sus homólogos sanos, lo que sugiere que la hepcidina puede ser un nuevo biomarcador de diagnóstico para el CHC.La proteína 14-3-3ζ en los exosomas producidos por 100 HCC puede reducir la activación, proliferación y diferenciación de las células T y puede inducir la transformación de las células T en células T reguladoras, lo que resulta en el agotamiento de las células T.101 Esto está respaldado por varios estudios que investigan la evasión tumoral de la vigilancia inmunológica, 102 que puede contribuir a la tumorigénesis del CHC.
Además de la presencia de ecRNA en plasma o suero, los exosomas enriquecidos con RNA se pueden usar para la estadificación no invasiva en tiempo real en la detección temprana de tumores y para determinar la evolución del tumor y la respuesta a la terapia.El nivel de miARN-21 exosomal en el suero sanguíneo en el grupo de HCC fue 2,21 veces mayor que en el grupo de CHB, y en el grupo de HCC fue 5,57 veces mayor que en la población sana.En el estudio de Wang, los exosomas aumentaron significativamente el CHC en comparación con los pacientes cirróticos con valores de AUC de 0,83 (IC del 95 %: 0,74 a 0,93) y 0,94 (IC del 95 %: 0,88 a 1,00).104 Los datos obtenidos aclararon la participación de moléculas de carga exosomales específicas en la regulación de la oncogénesis y la progresión del CHC.105 La expresión sérica de miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 y miR-26a es constante.y metástasis, y los niveles de miR21 fueron mucho más altos en pacientes con CHC que en controles sanos y también en pacientes con CHB.102 LncRNA tenía un valor diagnóstico potencial en CHC.Los estudios han demostrado que los exosomas derivados del suero de pacientes con HCC tienen niveles significativamente más altos de LINC00161, LINC000635 y lncRNA activados por el factor de crecimiento transformante β que en pacientes sin HCC, y estos lncRNA están fuertemente asociados con el estadio TNM y el volumen del tumor.110 Conigliaro et al.Se descubrió que los exosomas CD90+ expresaban altos niveles de lncRNAH19, lo que aumentaba significativamente la liberación del factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y la producción del receptor VEGF-R1, estimulando así la angiogénesis.93 Los circRNA son otro tipo de ncRNA exosómicos: expresados ​​en niveles más bajos pero estables en todas las especies, los circRNA también muestran especificidad por el tipo de célula, el tipo de tejido, la etapa de desarrollo y la actividad reguladora.111 circRNAs son biomarcadores de diagnóstico para el cáncer temprano y mínimamente invasivo.112 Ensayos clínicos recientes han demostrado que la especificidad de los miARN individuales para predecir el CHC no es ideal.Por lo tanto, la detección compleja mediante múltiples ensayos (p. ej., miR-122 y miR-48a en combinación con AFP) puede mejorar la identificación del CHC temprano y la diferenciación del CHC de la cirrosis.100
Los pacientes con CHB y cirrosis hepática son el grupo de alto riesgo más común para desarrollar CHC.Para los grupos de alto riesgo, una vez que se ha logrado una respuesta virológica sostenida, se debe desarrollar una estrategia de vigilancia rentable basada en el riesgo de CHC, y la detección temprana es la clave para mejorar el diagnóstico y el tratamiento del CHC con una alta relación costo-efectividad2 ..Los métodos de detección precoz del cáncer tienen muchas limitaciones: no se han desarrollado métodos de detección precoz eficaces para la mayoría de los tipos de cáncer, y el cumplimiento suele ser bajo.En comparación con los métodos de detección temprana tradicionales, la tecnología de biopsia líquida tiene ventajas obvias: facilidad de muestreo, detección panrac, buena reproducibilidad de la muestra y respuesta efectiva a la heterogeneidad del tumor.Dada la rentabilidad de los métodos asociados con la biopsia líquida, su uso en la detección de CHC no se ha probado de forma rutinaria.A pesar de los avances en la detección precisa a nivel molecular, la biopsia de líquido es costosa para detectar HCC en pacientes objetivo, lo que limita su uso generalizado en comparación con procedimientos de imagen específicos como la ecografía y la resonancia magnética.113,114 Sin embargo, un estudio anterior mostró que la biopsia líquida mostró un beneficio significativo en términos de años de vida ajustados por calidad (AVAC).115 También se han demostrado los beneficios de la biopsia líquida en el carcinoma temprano de estómago y nasofaringe.116,117 La opinión actual es que la biopsia líquida puede complementar los biomarcadores séricos y el cribado radiológico en la detección y el diagnóstico de tumores.117 118
De acuerdo con la literatura actual, la tecnología de biopsia de líquido ha mostrado una sensibilidad y especificidad significativamente más altas en la detección temprana de grupos de alto riesgo de cáncer de hígado.Independientemente del tipo de biopsia de líquido, puede distinguir el CHC de los individuos de alto riesgo sin CHC, lo que sugiere la importancia de la detección temprana ya que las diferencias entre los individuos de alto riesgo y los sanos son evidentes.El ctDNA tiene una vida media corta y puede usarse para detectar CHC, por lo que cualquier cambio en el cDNA derivado de un tumor puede proporcionar evidencia concreta en tiempo real de la progresión del tumor, especialmente para tumores pequeños.Un alto nivel de ctDNA indica el desarrollo y la diseminación del cáncer y es un indicador temprano de progresión y recurrencia.Además, en base a los resultados del ctDNA, los pacientes pueden recibir tratamiento y seguimiento individualizado.119 Los sitios de metilación específicos pueden ser un mejor marcador que la AFP para la identificación temprana de CHC y nódulos cirróticos.En los casos de HCC resecable, los altos niveles de cDNA son indicativos de invasión microvascular y recurrencia y metástasis postoperatorias.Los cambios en el número de copias están asociados con la supervivencia de los pacientes con HCC.Se puede suponer que la evaluación del cDNA puede estar involucrada en el tratamiento general del HCC, y el cDNA puede servir como un indicador eficaz de la modulación terapéutica.Las guías clínicas han adoptado marcadores basados ​​en mutaciones genéticas específicas en ctDNA para predecir la eficacia y monitorear la resistencia a los medicamentos.La prueba de ctDNA puede ser la herramienta de biopsia líquida más útil para la detección temprana.Los CTC también juegan un papel clave en la detección temprana de grupos de HCC de alto riesgo.Varios marcadores de CTC asociados con HCC son de particular importancia en el inicio, desarrollo y recurrencia de HCC.Como vesículas de membrana, los exosomas están involucrados en las comunicaciones intercelulares, especialmente en las células de CHC.Los microARN circulantes son estables en la sangre y, por lo tanto, pueden ser más útiles para la detección temprana de CHC.Gradualmente, se descubrieron proteínas exosomales y exosomas ricos en ARN, y se confirmó su eficacia predictiva para CHC.Curiosamente, diferentes etiologías de HCC también pueden estar asociadas con diferentes mutaciones, por lo que podemos seleccionar diferentes biomarcadores para la detección temprana en función de diferentes etiologías de HCC.120
Sin embargo, las técnicas actuales de biopsia de fluidos son cuestionables en términos de estabilidad y no pueden realizar de forma independiente una detección temprana o un control del CHC, pero aún pueden complementar la detección y el diagnóstico individuales.121 Como una forma de biopsia líquida, la detección y la obtención de imágenes de ctDNA, CTC, cfRNA y AFP o PIVKA-II asociados a exosomas tienen aplicaciones prometedoras en el diagnóstico temprano y el pronóstico del CHC.Sin embargo, queda por dilucidar el mecanismo exacto de liberación de ctDNA en la sangre.Revelar las propiedades biológicas básicas del ctDNA puede facilitar su uso como marcador.La pequeña cantidad de ctDNA en circulación y los estrictos requisitos de manipulación de muestras son desafíos para la implementación clínica de la detección de cDNA en CHC.Además, las mutaciones genéticas no tienen características específicas que permitan una identificación precisa de los carcinógenos.Dado que múltiples variantes genéticas y somáticas también están presentes en los tejidos normales, las mutaciones genéticas identificadas por biopsia de líquido pueden tener una utilidad limitada en la detección temprana de CHC.122 Las limitaciones de objetivos genéticos útiles bien definidos y biomarcadores que ayudan a diferenciar el ADNc del ADN no tumoral son los problemas más importantes en el uso del ADNc.falta de utilidad de marcadores sensibles y específicos para la detección de CTCs.Solo se encontraron células viables con potencial metastásico y no estaba clara la combinación óptima de marcadores enriquecidos con CSC.El aislamiento de CTC para cultivo y evaluación de sus perfiles mutacionales también es una tarea desafiante.Debido a problemas con la identificación, el aislamiento y la purificación de los exosomas, el mecanismo molecular específico aún no está claro, y los estudios previos sobre el mecanismo de los exosomas y el HCC no han sido profundos, y la forma en que los miRNA, lncRNA y las proteínas se clasifican en exosomas. , y no está claro si la captación de exosomas es un proceso de tipo específico.El uso de exosomas para el diagnóstico y tratamiento del CHC aún se encuentra en etapa preclínica.La falta de estandarización de los procedimientos de biopsia líquida, como el tipo de tubos utilizados para recolectar sangre, el volumen de sangre, el almacenamiento y detección de muestras, el aislamiento y el enriquecimiento, puede impedir su uso en la práctica clínica de rutina debido a las diferencias en las prácticas entre los centros médicos.Queda por explorar la eficacia de la biopsia líquida en la detección temprana, el diagnóstico, la evaluación de la eficacia y la predicción del CHC, especialmente para los grupos de alto riesgo.La tecnología de biopsia líquida tiene un gran potencial y se espera que se utilice ampliamente en la práctica clínica del cáncer de hígado en un futuro próximo.
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